與低容量板（包括 384孔板和較小的板格式）相關(guān)的液體處理挑戰(zhàn)必須格外小心，以防止培養(yǎng)過程中 iCell? 肝細(xì)胞 2.0 的過度損失。

為了最大限度地減少 384 孔 2D 培養(yǎng)形式中的細(xì)胞損失，我們建議您：

• 以 30,000 個(gè)細(xì)胞/孔的密度進(jìn)行平板培養(yǎng)。每個(gè) 384 孔板的表面積約為 96孔板的三分之一。 請(qǐng)注意，在一個(gè) iCell 肝細(xì)胞 2.0 冷凍管中可以使用 ≥900 萬個(gè)活細(xì)胞來接種多達(dá) 300 個(gè)孔。隨著時(shí)間的推移，以較低密度鋪板可能會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)物惡化。
• 保持電鍍培養(yǎng)基或維護(hù)培養(yǎng)基的培養(yǎng)基體積為 40 - 60 μl/孔。
• 根據(jù)我們的用戶指南， 遵循 96 孔板的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基更換時(shí)間表。
• 更換培養(yǎng)基時(shí)避免接觸每個(gè)孔的底部。設(shè)置液體處理器的探頭高度，使探頭尖端不會(huì)接觸孔底；如果手動(dòng)移液，請(qǐng)確保移液器吸頭不會(huì)接觸孔底。
• 更換培養(yǎng)基時(shí)使用低移液速度。將液體處理器的分配速度設(shè)置為低流速，以防止細(xì)胞從孔底部分離； 如果手動(dòng)移液，則將移液器吸頭接觸孔的一側(cè)，然后沿著孔的一側(cè)緩慢分配。 分配后，在離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)板，使介質(zhì)到達(dá)孔底部。
• 通過去除除 20 μl 之外的所有廢培養(yǎng)基并添加新鮮培養(yǎng)基以彌補(bǔ)體積差異來進(jìn)行培養(yǎng)基更換。在每個(gè)孔中使用 50 μl 培養(yǎng)基的示例中，取出 30 μl（50 μl 減 20 μl）用過的培養(yǎng)基并添加 30 μl 新鮮培養(yǎng)基。
• 避免使用板外邊緣的孔，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀壮霈F(xiàn)蒸發(fā)問題，導(dǎo)致培養(yǎng)物變質(zhì)，特別是培養(yǎng)時(shí)間超過 5 天時(shí)。我們建議僅使用內(nèi)部 240 個(gè)孔來培養(yǎng)細(xì)胞，并僅用培養(yǎng)基填充外部?jī)尚泻蛢闪小?/span>
• 盡可能減少液體處理步驟。執(zhí)行僅添加步驟而不清洗，以盡量減少細(xì)胞破壞，特別是對(duì)于經(jīng)過化合物處理的細(xì)胞。
• 當(dāng)需要清洗時(shí)，進(jìn)行稀釋而不是 100% 更換培養(yǎng)基。例如，除去除 10 - 20 μl 之外的所有培養(yǎng)基，添加 50 μl 洗滌液，并重復(fù) 2 - 3 次進(jìn)行稀釋。
• 使用預(yù)涂有 I 型膠原蛋白的組織培養(yǎng)板進(jìn)行細(xì)胞附著。 不要手動(dòng)涂抹新鮮的膠原蛋白 I 涂層。
• 將板倒置在吸水紙上并離心以倒出介質(zhì)以進(jìn)行不再需要無菌的終點(diǎn)測(cè)定。
• 使用與電鍍介質(zhì)和維護(hù)介質(zhì)類似的 RPMI（不含補(bǔ)充劑）代替 PBS 進(jìn)行清洗，因?yàn)?PBS 會(huì)加劇分離。