熱門關(guān)鍵詞: 自動(dòng)化吸頭 移液器吸頭 PCR管 細(xì)胞培養(yǎng)皿
今天,我們來聊一聊PCR實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)關(guān)鍵要素——耗材。作為PCR的???,了解PCR耗材相關(guān)的特性和術(shù)語是很有必要的。
市面上的PCR耗材琳瑯滿目,品牌、規(guī)格、顏色等琳瑯滿目,令人眼花繚亂。讓我們一步一步來了解它。
1.材料
通常,PCR耗材的原材料是聚丙烯。是一種良好的耐熱惰性材料。工作溫度范圍為-30~140℃,使其能夠承受PCR反應(yīng)熱循環(huán)過程中的熱能變化,對(duì)PCR反應(yīng)體系中的物質(zhì)起到很好的密封和保護(hù)作用。
2. 顏色
常見的有白管和透明pcr管。 在傳統(tǒng)的 PCR 實(shí)驗(yàn)中,兩者沒有區(qū)別。然而,在同一個(gè)實(shí)時(shí)/qPCR 實(shí)驗(yàn)中,對(duì)于具有頂端信號(hào)讀取的 qPCR 儀器,白管相對(duì)更敏感和一致(參見下圖 A 和 B)。 為什么是這樣?
與透明管相比,A:白色管的 Ct 值較低;B:用白色管獲得更好的重復(fù)性。
qPCR的核心數(shù)據(jù)是Ct值,而熒光信號(hào)是計(jì)算Ct值的數(shù)據(jù)源,因此管內(nèi)的熒光能否完整傳輸?shù)綑z測(cè)器非常重要。白色的管壁阻止熒光穿過管壁和折射(下圖A),從而阻止熒光傳輸?shù)郊訜崮K(即放置管的金屬孔壁)并被模塊吸收或不一致反映。 與透明管相比,在白色管的尖端收集到了更強(qiáng)、更集中的熒光信號(hào)(下圖 B)。
A:透明管和白管中熒光信號(hào)的變化趨勢(shì); B:加入等量熒光素后,熒光強(qiáng)度比較。
因此,如果您使用的是頂讀 qPCR 儀器,不妨試試白色試管。
3.質(zhì)量(精益或不精益 )
這里強(qiáng)調(diào)了耗材質(zhì)量的重要性。qPCR 耗材必須不含污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細(xì)菌和 DNase,但不能去除灰塵和 DNA 殘留物,它們可能會(huì)抑制 PCR 反應(yīng)或產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。 物質(zhì)具有吸光度,即使是微小的污染物也會(huì)吸收反應(yīng)體系中的熒光,影響熒光信號(hào)的采集。實(shí)驗(yàn)的夸張版本用于證明雜質(zhì)污染對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。如下圖所示,在八聯(lián)管的其中一個(gè)反應(yīng)孔中放置了一個(gè)雜質(zhì)。 正如預(yù)期的那樣,擴(kuò)增曲線顯示出明顯的異常。
↑ 反應(yīng)管中的雜質(zhì)
↑ 8管條重復(fù)反應(yīng)結(jié)果,左井雜質(zhì)使曲線“偏離”。
溫馨提示:注意不要讓耗材長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。取出耗材后,請(qǐng)務(wù)必迅速封好包裝袋,避免徒手接觸。 如果可能,請(qǐng)?jiān)诔瑑艄ぷ髋_(tái)上操作。
4.容量/ 尺寸 / 通量
體積決定了可以加載多少樣品(反應(yīng)體積)。劑量過多可能導(dǎo)致傳熱效率降低、溢出或交叉污染; 而劑量不足可能會(huì)導(dǎo)致樣品蒸發(fā)損失。 qPCR 儀器的加熱模塊還將確定適用的耗材和適用的反應(yīng)系統(tǒng)尺寸。吞吐量很容易理解,它是單個(gè)實(shí)驗(yàn)中可以加載的最大樣本數(shù)。常用容量和通量規(guī)格如下表所示:
容量規(guī)格通常也分為標(biāo)準(zhǔn)型和低型,如下所示。低調(diào)耗材的高度較低。這種短小的設(shè)計(jì)最大限度地減少了反應(yīng)系統(tǒng)上方的空間(“死體積”——無用的部分),減少了熱循環(huán)過程中蒸發(fā)的影響,并使加熱模塊能夠更大程度地包裹它,以提高傳熱效率。 因此,低剖面管也稱為“快速”管或板。
溫馨提示:一般常用的反應(yīng)體積為20 μL,推薦使用0.1 mL或小體積的小體積反應(yīng)管。
5.管壁 厚度
管壁的厚度會(huì)直接影響導(dǎo)熱系數(shù)。PCR 耗材應(yīng)具有均勻的壁厚,以提供一致的熱傳遞。 超薄管壁比標(biāo)準(zhǔn)版薄50%,進(jìn)一步降低熱障,帶來更快更好的反應(yīng)效果。 因此,為了最大限度地提高 PCR 反應(yīng)的效率,確保反應(yīng)穩(wěn)定高效,均一且超薄的 PCR 耗材是最佳選擇。
6. 透明度
qPCR的管蓋和密封膜需要具有較高的光學(xué)透明度,以確保熒光信號(hào)的最佳穿透和傳輸,同時(shí)減少失真(適用于top-read qPCR儀器)。管壁的透明度越高,可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 原因上面已經(jīng)解釋過了。傳統(tǒng)的 PCR 可以忽略這個(gè)特性。
7.裙板
PCR板的裙邊是指板的周邊延伸部分。 在構(gòu)建反應(yīng)系統(tǒng)時(shí),該裙邊可作為移液過程的穩(wěn)定支撐,并在結(jié)合自動(dòng)化工作站時(shí)提供機(jī)械強(qiáng)度和抓握力。 常見的有無裙、半裙和全裙三種(分別對(duì)應(yīng)下圖中的A、B、C)。
無裙板: 可用于大多數(shù) PCR 或 qPCR 儀器,但不適用于自動(dòng)化應(yīng)用。在移液過程中容易移動(dòng),不是很穩(wěn)定,需要與板架一起使用。
半裙板: 適用于具有良好移液穩(wěn)定性的自動(dòng)化應(yīng)用。
全裙邊板: 非常適合自動(dòng)化應(yīng)用。機(jī)械強(qiáng)度好,適用于帶有突出模塊的PCR儀器,移液過程中穩(wěn)定性高。
Tips:裙邊的意義更多的是便于工業(yè)化和自動(dòng)化批處理,與機(jī)械臂相結(jié)合。 在傳統(tǒng)的研究實(shí)驗(yàn)室中可能不需要它,無裙板就足夠了。
8. 封口膜
PCR板密封膜由透明塑料或鋁箔制成。 粘性透明膜較為常見,適用于96或384孔板,應(yīng)具有足夠好的透光率。 封膜時(shí),會(huì)用小卡片將封孔周圍的膜壓緊,以免出現(xiàn)漏氣等現(xiàn)象。
粘性鋁膜可能不太常見。雖然不適用于qPCR,但它是光敏樣品最理想的耗材。 因?yàn)樗梢员淮蚩?,所以便于PCR中的樣品轉(zhuǎn)移(對(duì)于傳統(tǒng)PCR)。
總結(jié)
作為PCR系統(tǒng)的載體,耗材對(duì)于提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的質(zhì)量非常重要。希望本次分享能夠幫助您了解PCR耗材的一些小技巧,為更好地選擇耗材提供幫助。
【本文標(biāo)簽】 pcr板 pcr管 8聯(lián)排管
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