污染是細胞培養(yǎng)的大敵。預防和避免污染是細胞培養(yǎng)成功的關鍵之一。

一、污染的清除

培養(yǎng)細胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細胞價值不大，宜棄之。有細胞株留存的或可購置的，可在尋找原因后徹底消毒操作室，復蘇或重新購置細胞，再培養(yǎng)。若污染細胞價值較大，又難干重新得到，可采取以下辦法清除。

1.使用抗生素

抗生素對殺滅細菌較有效，聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好，預防用藥比污染后再用藥效果好。

預防用藥一般用雙抗牛素(青霉素100u/ml加鏈霉素100ug/mL)，污染后清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法，于加藥后作用24~48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。

所用抗生素品種除青霉素、鏈霉素外，還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制霉菌素等。常用400~800ua/ml卡那霉素或200ua/ml四環(huán)素外理，每隔2~3日換液1次，傳1~2代進行治療。

2.加溫處理

將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時，可殺死支原體，但對細胞有不良影響。所以在處理前要進行預試驗，摸索能最大限度殺死支原體又對細胞影響最小的加熱時間。此法有時不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。

3.使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清(血凝效價1:320以上)可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉為陰性，并且5個月后仍為陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟

4.其他方法

除了上述去除污染的方法外，還有動物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等，但均較麻煩，目效果不確定。所以一日支原體污染，除非有特別重要價值，一般均棄之重新培養(yǎng)。

二、污染的預防

預防是防止細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的最好辦法。只有預防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。一般預防可從以下幾方面著手。

1.從物品、用品消毒滅菌著手

細胞培養(yǎng)所用物品清洗，消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。

2.從操作者做起

(1)操作者責任心要強，要細心穩(wěn)重，操作技術要熟練。

進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(guī)定穿隔離衣。進入后關好門，坐下來盡量少走動。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

事先要嚴格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大批污染。

(2)操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉動燒灼。